核系统酵母文库

实验原理：真核生物的转录因子GAL4含有两个不同的结构域：DNA结合结构域（binding domain，BD）和转录激活结构域（activating domain，AD）。

二者可以从结构上分开而独立表达出有功能的结构域，当二者在空间上充分接近时，表现出完整的转录因子的活性。

酵母文库构建

基本实验流程：RNA提取→cDNA文库构建

详细实验步骤：1、RNA提取 mRNA分离
2、DNA合成与接头连接（三框库） cDNA按长度分离 （均一化处理）

3、重组到酵母单杂交载体pGADT7上和电转化

4、文库检测和质粒提取

5、数据整理和分析

酵母文库的质量指标

文库库容量>1*10^7CFU

平均插入片段0.8 - 1.5 kb (根据物种而定) 空载率<5%

交付材料

酵母文库甘油菌1.0ml EP管 (4管）

酵母文库质粒400ug

酵母工作菌液40ml

酵母双杂交文库筛选

基本实验流程：自激活检测→文库筛选→回转验证

详细实验步骤

①诱饵质粒自激活实验验证

②誘饵质粒转化和文库质粒转化

③酵母筛选的条件优化 ④筛选结果测序

⑤筛选结果回转验证 ⑥数据整理和分析

交付材料
阳性克隆测序结果（≥25个）

Word文档电子版项目报告

酵母双杂交一对一验证

实验步骤：诱饵质粒的自激活验证

一对一验证： pGBKT7-A+pGADT7-B（实验组）

pGBKT7-p53+pGADT7-large T（阳性对照）

pGBKT7-lam+pGADT7-large T（阴性对照）

服务特色：经验足 周期短 性价比高 通量高

客户提供

①构建酵母文库材料

细胞样本：细胞数量＞1*10^7 动物样本：＞lg

植物样本：＞2g 总RNA: ＞200μg

②酵母单杂筛库材料

启动子序列 含有诱饵基因的质粒（可选）

技术优势

1、蛋白质不需要纯化，完全核酸水平操作；

2、基因表达产物的积累效应能够作为检测结果，因而弱互作和暂时的互作也能检测到；

3、活细胞中进行，一定程度上表现细胞内部真实性；

4、广泛性。

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