酵母单杂原理介绍：体外分析DNA与细胞内蛋白质相互作用的一种方法。将已知特定顺式作用元件构建到最基本启动子上游，下游连接报告基因，通过对酵母细胞内报告基因表达状况的分析，来鉴别DNA结合位点并发现潜在的结合蛋白基因。

酵母文库构建

基本实验流程：RNA提取→cDNA文库构建

详细实验步骤：

①RNA提取 mRNA分离
②DNA合成与接头连接（三框库）

cDNA按长度分离 （均一化）

③重组到酵母单杂交载体pGADT7上和电转化

④文库检测和质粒提取

⑤数据整理和分析

酵母文库的质量指标

文库库容量>1*10^7CFU

平均插入片段0.8 - 1.5 kb (根据物种而定) 空载率<5%

交付材料

酵母文库甘油菌1.0ml EP管 (4管）

酵母文库质粒400ug

酵母工作菌液40ml

酵母单杂交文库筛选

基本实验流程：启动子背景筛查→文库筛选→回转验证

详细实验步骤：

①Binding seq基因启动子的背景筛查

②誘饵质粒转化和文库质粒转化

③酵母筛选和3AT条件优化

④筛选结果测序

⑤筛选结果回转验证

⑥数据整理和分析

交付材料
阳性克隆测序结果（≥25个）

Word文档电子版项目报告

酵母单杂交一对一验证

实验步骤：Binding seq基因启动子的背景筛查

一对一验证： pHis-A+pGADT7-B（实验组）

pHIS2-p53+pGADT7-53m（阳性对照）

pHIS2+pGADT7-53m（阴性对照）

服务特色：经验足 周期短 性价比高 通量高

客户提供

构建酵母文库材料

细胞样本：细胞数量＞1*10^7 动物样本：＞lg

植物样本：＞2g 总RNA: ＞200μg

酵母单杂筛库材料

启动子序列 含有诱饵基因的质粒（可选）

酵母单杂交技术优点

1、无需分离纯化蛋白，实验简单易行

2、克服了体外研究时蛋白质通常处于非自然构象的缺点，因而具有很高的灵敏性。

酵母单杂交应用

1、检测已知DNA与蛋白之间是否存在相互作用；

2、分离编码结合于目的顺式调控元件或其他短DNA结合位点蛋白的新基因；

3、定位已经证实的具有相互作用的DNA结合蛋白的DNA结合结构域以及准确定位与DNA结合的核苷酸序列。

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