Nanjing baiyike Biotechnology Co., Ltd
仪器的介绍
我司目前针对激素测定所用的仪器有安捷伦1290高效液相色谱仪串联AB公司Qtrap6500质谱仪、安捷伦1260高效液相色谱仪串联6420A质谱仪两台。
激素测定种类
项目
序号
指标
方法简介
最少样品量/ml/g
植物激素
1
游离态生长素
IAA
LC-MS/MS（同位素内标法）
800mg，种子样品200mg
2
IBA
2g，苹果组织200mg
结合态生长素
吲哚乙酸-天冬酰胺IAA-ASP
0.5g
3
吲哚乙酸-谷氨酸IAA-GLU
4
生长素前体
吲哚乙腈IAN
5
吲哚丙酮酸IPYA
6
吲哚乙酰氨IAM
7
色胺TAM
8
脱落酸
ABA
500mg，种子样品100mg
9
游离态茉莉酸
JA
800mg
10
结合态茉莉酸
MEJA
2g
11
茉莉酸-异亮氨酸JA-ILE
12
茉莉酸前体
植物二烯酸OPDA
13
游离态水杨酸
SA
200mg，水稻样品50-100mg
14
结合态水杨酸
MESA
15
天然细胞分裂素
TZR
DZR 顺式玉米素核苷
16
Zeatin
17
IP
18
IPA
19
人工合成细胞分裂素
6-苄氨基嘌呤6BA
20
激动素6KT
21
赤霉素系列
活性赤霉素1，3，4，7，
22
非活性赤霉素GA5,6,8,9,13,15,19,20,24,34，44,51,53
1g
23
褪黑素
LC-MS/MS（同位素外标法）
24
油菜素内酯系列
（BL,CS,6-DeoxoCS,28-高油菜素内酯，香蒲甾醇）
25
独脚金内酯
(5DS,strigol,GR24)
26
ACC
ACC（乙烯前体）
200mg
乙烯
乙烯（气体）
气相色谱
10ml
激素的测定过程
以高效液相色谱仪串联质谱仪测定。高效液相色谱二元泵将流动相泵入系统并混合，自动进样器将待测样品注入流动相中，随流动相进入色谱柱，由于样品不同组分在色谱柱中保留时间不同，各组分被分开，依次进入离子源。在离子源中，各组分以电喷雾电离(ESI)方式电离，被加速后进入质量分析器。质量分析器由Q1、Q2、Q3三级质谱串联组成。Q1可将分子离子按质荷比(m/z)大小分开，Q2是碰撞室，可将母离子进一步裂解为碎片离子；Q3具有四级杆和线性离子阱两种功能，作为四级杆时可将分子离子或碎片离子按质荷比大小分开，作为离子阱还可富集离子从而提高检测灵敏度。各组分的不同离子在质量分析器中被破碎、分离，并按质荷比大小依次抵达监测器，得到检测数据。
本实验以多反应检测（MRM）模式扫描检测待测物质。该模式是一种基于已知或假定的反应离子信息，有针对性地选择数据进行质谱信号采集，对符合规则的离子进行信号记录，去除不符合规则离子信号的干扰，通过对数据的统计分析从而获取质谱定量信息的质谱技术。该模式由于通过两级离子选择，排除大量干扰离子，使质谱的化学背景降低，目标检测物的信噪比显著提高，从而实现检测的高灵敏度。并且由于选择性的质谱信号采集中，避免了待测分子离子化、质谱信号的抑制及源内碰撞碎裂过程的影响，使得实验有良好的重现性。进而提高了检测的准确性，因此适合作为定量分析的工具。对于待测物，我们将检测2个或以上的碎片离子，并将其出峰时间、响应值之比同标准品对应，以鉴定检出物，最终以标曲对检出的待测物
激素检测 FAQ
标准曲线怎么看？
首先标曲要做几个点？标曲的配置
一般是做五个点（不包括零浓度）；一般以检出限的5~10
倍为第一个点，以后根据1倍递增，
最高浓度是最低浓度的10~20倍为宜（理化分析实
验为例）。当然，要根据仪器的灵敏度来调整。
标准曲线是否必须过原点？
标准曲线不一定非要过原点，只要线性好就可以了。
标曲R值是几个9才合格？
检测标准（方法）如无具体的要求，
至少使用5个标样（除空白外）建立线性标准曲线，每
个点重复测定1-3次，对于筛选方法，
线性回归方程的相关系数不应低于0.98，对于确
证方法，相关系数不应低于0.99。
为什么用内标法？内标法的优点有哪些？
内标相当于一根标杆，利用化合物和内标的
峰面积比值来定量，减小或消除了基质效应，
定量更准确。
操作过程中样品和内标是混合在一起注入
色谱柱，因此只要混合溶液中被测组分与内标
的量的比值恒定，上样体积的变化不会影响影响定量结果。
内标法抵消了前处理的操作误差，乃至流动相、
检测器的影响。
每次开机都必须做标准曲线吗？
每天所配的流动相都会有所不同，
导致出峰的时间都会有一定的差异，峰面积相应都有所差异。检测器光能也在不断的衰弱，因此其每天的
相应值也有所不同，其峰面积也有差异。
基于以上原因，原则上应该是每天都要进行标准曲线校正的。
质控方面的说明
进样前会先跑标准品，每个点进两针，保证重复性没有问题后才会跑样品。
上样时每十个样进一个质控样（标样），一般进中间浓度的质控样，与原来的峰面积进行比较，如果峰面积偏差不超过10%则判断稳定性合格
客户有要求的话可对其样品做添加回收，但一般样品都是盲样，无法很好的控制添加回收的标样量（一般要求添加标样的量和样品中的目标物含量一致）。建议用内 标法做会更准确。
对于内源植物激素很难做基质空白对照，如做植物生长调节剂等外源激素，客户可提供空白基质，实验时可扣除基质干扰，使结果更准确。
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